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admin 发表于 2006-8-22 15:06

蛋白质测定时的问题及解决

粗蛋白质测定的经典方法是“凯氏定氮法“。实验过程中会遇到一些问题,现在本人根据实验的心得,作如下总结,希望对大家有所帮助。
第一步:消化
样品1.0"5.0g,加入蒸馏水1ml及5ml浓硫酸,加催化剂(硫酸钾:硫酸铜=1:15),于550度消化1.5-2h左右。
经常遇到的问题----解决方案
1.消化前,消化管内壁上粘上样品----用纸槽,把它伸进消化管底部,把样品延纸槽送至消化管底部;因为蒸馏水在550度的高温下造就挥发了,所以水的量对消化影响不大,可以用适量的水把壁上样品冲下去。
2.消化时,消化管内壁上粘上样品----550度的高温会使样品在消化管激烈翻腾,可以缓慢加热,由200-300-400-550度,慢慢加温。第二步:蒸馏
向消化液(有时要稀释),加入10ml40%NaOH,蒸馏,用硼酸吸收氨气。
经常遇到的问题----解决方案
终点的判断,由于硼酸无色,吸收了氨气以后,仍为无色-----可以在硼酸中加入溴甲酚绿-甲基红指示剂,这样硼酸就为红色了,当吸收氨气后为蓝色第三步:滴定
用盐酸滴定硼酸吸收液
终点为红色
中的溴甲酚绿-甲基红指示剂在“滴定”时加入,本人认为在“蒸馏”时加入,更便于“蒸馏”终点的观察。
以上仅为本人的拙见,欢迎批评指正!

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